Microscopie van plantvezels

Protocol Maceraties

  1. Doe de plantenvezels (ongeveer een derde van de grootte van een lucifer) in een reageerbuis en voeg 2-3 ml (of genoeg om het monster te bedekken) Schulz's oplossing toe:
     
    • Kaliumchloraat (KCIO3): 24g
    • Gedestilleerd water: 200 ml
    • Salpeterzuur (100%): 200 ml
  2. Voor hout: Incubeer (reageerbuisverwarming) bij 40°C tot 60°C gedurende 5 min. Voor de meeste plantenvezels is dit niet nodig en het verhoogt het risico op het oplossen van de vezel.
  3. Wanneer de maceratie voltooid is, zijn de plantenvezels doorschijnend en beginnen de vezels los te komen van het monster. Als de vezel niet is zoals hierboven beschreven, ga dan door met macereren, en observeer elke 5 minuten (of minder) totdat u het juiste resultaat krijgt.
  4. Was 3 maal met gedestilleerd water. Pipetteer hiervoor de vloeistof zonder de plantenvezels te verwijderen (glaspipet) en vul vervolgens de reageerbuis met gedestilleerd water (het kan nuttig zijn de monsters een nacht in het spoelwater te laten staan)
  5. Leg het monster gedurende 3 min in de kleuroplossing (Safranin O & Alcian Blue) (gebruik kleine zeefjes).
  6. Dehydrateer het monster (5 min) in een opeenvolging van 50%, 75%, 96% en 100% alcoholoplossingen.
  7. Plaats een kleine hoeveelheid plantenvezelfragment op een objectglaasje en trek de stukjes voorzichtig uit elkaar met een pincet. Het kan nuttig zijn een beetje 100% alcohol aan het glaasje toe te voegen.
  8.  Voeg een paar druppels Euparal toe, plaats het glaasje voorzichtig en laat het preparaat drogen.

    (Opmerking: aangezien rokend salpeterzuur duurder en gevaarlijker is, kan het beter zijn 60% of 50% salpeterzuur te gebruiken en dus de verdunning van de oplossing aan te passen).

Protocol Dwars doorsneden

  1. Los Polyethyleenglycol (PEG) 5000 op in de oven (50-70°C)
  2. Leg de plantenvezels in een siliconen bakje voor ijsblokjes. Ze moeten verticaal of horizontaal maar niet diagonaal op de bodem worden gelegd.
  3. Giet de PEG in de bakjes, de vezel moet volledig bedekt zijn.
  4. Zet het bakje een nacht in de over (50-70°c) zodat de PEG in de vezel kan trekken.
  5. Zet het bakje uit de oven en laat het 5 minuten bij kamertemperatuur staan. De vezels mogen niet meer bewegen. Als ze dat wel doen, plaats de vezel dan terug horizontaal of verticaal op de bodem.
  6. Zet de bak 20-30 minuten in de koelkast om de PEG te laten stollen.
  7. Haal de blokken uit de bak en snijd de randen gelijk met een mes. Plaats het blok vervolgens op het halfautomatische microtoom.
  8. Voor plantenvezels worden plakjes van 20 nm gemaakt met plakband. De vezel wordt aan het plakband geplakt en de PEG lost op in water.
  9. Leg het monster op het objectglaasje en dek het af met een zeef, die wordt vastgehouden met twee elastiekjes.
  10. Leg het monster gedurende 5 minuten in de kleuroplossing (Safranin O & Alcian Blue).
  11. Dehydrateer het monster (3 min) in een opeenvolging van 50%, 75%, 96% en 100% alcoholoplossingen.
  12. Voeg een paar druppels Euparal toe, plaats het dekglaasje voorzichtig en laat het preparaat drogen.